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Identificación y caracterización de correctores de segunda generación

Poster 194 - Correction of the most frequent premature termination codon mutations in CFTR by site-directed RNA

Según Vallecillo-Viejo, de la Universidad de Puerto Rico, es posible determinar y modificar el ARN mensaje que lleva un codón de parada prematuro.

Los ARN mensajeros son moléculas que pueden estar producidas por las enzimas de la familia ADAR. La actividad de estas enzimas permite convertir la adenosina (A) en inosina (I), nucleósido que presenta una estructura parecida a la de la guanosina (G). De este modo, durante la traducción de este nucleótido, la ribosa traduce la inosina en guanosina y no en adenosina. La combinación de una ADAR con una guía ARN permite determinar las regiones del ARN que contiene el codón de parada prematuro nocivo (UAA, UAG o UGA). Se ha evaluado la eficacia de este enfoque en cinco codones de parada frecuentes de CFTR en las células HEK293 transfectadas de manera transitoria con la ADAR, la guía ARN y un plásmido que expresa el CFTR mutado.

El análisis mediante RT-PCR muestra un nivel de edición variable en las células que dependen del codón de parada prematuro analizado: G542X (37%), W1282X (63%) R553X (46%) R1162X (86%) y Y122X (75%). Asimismo, se ha observado la edición de otras transcripciones que presentan secuencias similares a la guía utilizada, lo que revela que existen ediciones no específicas. Se ha introducido un signo de localización nuclear en la enzima ADAR, lo que ha permitido disminuir la edición no específica, aunque, de igual manera, se ha traducido en una disminución de la actividad de la enzima. Llegados a este punto, el autor se propone realizar la edición del ARN mensajero en otras células modelo, tales como las células epiteliales de tiroides en ratones Fisher (FRT), que manifiestan de manera estable estas construcciones de CFTR mutado y de las células primarias de pacientes.

Este estudio muestra la viabilidad del enfoque que tiene como objetivo editar las transcripciones que contienen codones de parada prematuros. No obstante, aún queda por validar la eficacia del método en un sistema celular apropiado, como las células epiteliales de los pacientes. Asimismo, es indispensable disminuir la edición no específica de las transcripciones que probablemente modifican las guías utilizadas.


Extraído de la comunicación de Vallecillo-Viejo, Universidad de Puerto Rico.

Autor

 

Dr Alexandre Hinzpeter

INSERM, Unité U955, Créteil, France
Université Paris-Est, Créteil, France

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